Hotstart Taq DNA 중합효소
Hot Start Taq DNA Polymerase(항체 변형)는 Thermus aquaticus YT-1의 hot-start 열안정성 DNA 중합효소로, 5'→3' 중합효소 활성과 5' 플랩 엔도뉴클레아제 활성을 보유하고 있습니다.hot-start Taq DNA 중합효소는 열에 불안정한 Taq 항체에 의해 변형된 Taq DNA 중합효소입니다.항체 변형은 PCR의 특이성, 민감도 및 수율을 증가시켰습니다.
구성요소
| 요소 | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq 버퍼 | 4×1mL | 4×10mL | 4×50mL | 5×400mL |
| Hot Start Taq DNA Polymerase(변형된 항체)(5 U/μL) | 0.1mL | 1mL | 5mL | 10×5mL |
응용
10mM Tris-HCl(25℃에서 pH 7.4), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM 디티오트레이톨, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 및 50% 글리세롤.
보관상태
0°C 미만에서 운송하고 -25°C~-15°C에서 보관하세요.
단위 정의
1단위는 75°C에서 30분 동안 15nmol의 dNTP를 산불용성 물질에 결합시키는 효소의 양으로 정의됩니다.
품질 관리
1.Endonuclease 활동:20U의 효소를 4μg의 pUC19 DNA와 함께 37℃에서 4시간 동안 배양한 결과 겔 전기영동으로 측정한 결과 DNA의 분해가 검출되지 않았습니다.
2.5kb 람다 PCR:200μM dNTP 및 0.2μM 프라이머가 있는 상태에서 1.25단위의 Taq DNA 중합효소를 사용하여 5ng Lambda DNA를 25사이클 PCR 증폭하면 예상되는 5kb 생성물이 생성됩니다.
3.엑소뉴클레아제 활성:최소 12.5U의 Taq DNA Polymerase와 10nmol 5'-FAM 올리고뉴클레오티드를 포함하는 50μl 반응을 37℃에서 30분 동안 배양하면 검출 가능한 분해가 발생하지 않습니다.
4.RNase 활동:20U의 효소와 1μg의 RNA 전사체를 함유한 10μL 반응을 37°C에서 2시간 동안 배양한 결과, 겔 전기영동으로 측정한 결과 RNA가 분해되는 것은 감지할 수 없었습니다.
5.열 불활성화:아니요.
반응 시스템
| 구성요소 | 용량 |
| 템플릿 DNAa | 선택 과목 |
| 10 μM 포워드 프라이머 | 0.5μL |
| 10 μM 역방향 프라이머 | 0.5μL |
| dNTP 믹스(각 10mM) | 0.5μL |
| 5×HC Taq 버퍼 | 5μL |
| Taq DNA 중합효소비(5U/μL) | 0.125μL |
| 뉴클레아제가 없는 물 | 최대 25μL |
노트:
1) 가.
| DNA | 양 |
| 게놈 | 1ng-1μg |
| 플라스미드 또는 바이러스 | 1페이지-1ng |
2) ㄴ.특수 응용 분야에서 Taq DNA Polymerase의 최적 농도 범위는 5~50 단위/mL(0.1~0.5 단위/25 µL 반응)일 수 있습니다.
열 순환 프로토콜
PCR
| 단계 | 온도(℃) | 시간 | 사이클 |
| 초기 변성a | 95℃ | 1~3분 | - |
| 변성 | 95℃ | 15-30초 | 30-35 사이클 |
| 가열 냉각비 | 45~68℃ | 15-60초 | |
| 확대 | 68℃ | 1kb/분 | |
| 최종 연장 | 68℃ | 5분 | - |
노트:
1) 대부분의 증폭에는 95°C에서 1분의 초기 변성으로 충분합니다.어려운 템플릿의 경우 95°C에서 2~3분의 더 긴 변성을 권장합니다.Colony PCR의 경우 95°C에서 처음 5분 동안 변성을 권장합니다.
2) 어닐링 단계는 일반적으로 15-60초입니다.어닐링 온도는 프라이머 쌍의 Tm을 기준으로 하며 일반적으로 45~68℃입니다.
