Rnase 억제제
쥐과 RNase 억제제는 E.coli에서 발현 및 정제된 재조합 쥐과 RNase 억제제입니다.이는 비공유 결합을 통해 RNase A, B 또는 C와 1:1 비율로 결합하여 세 가지 효소의 활성을 억제하고 RNA가 분해되는 것을 방지합니다.그러나 RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H 또는 Aspergillus의 RNase에는 효과적이지 않습니다.Murine RNase 억제제는 RT-PCR, RT-qPCR 및 IVT mRNA로 테스트되었으며 다양한 상업용 역전사 효소, DNA 중합 효소 및 RNA 중합 효소와 호환되었습니다.
인간 RNase 억제제와 비교하여, 쥐 RNase 억제제에는 억제제의 비활성화를 유발하는 산화에 매우 민감한 두 개의 시스테인이 포함되어 있지 않습니다.이는 낮은 농도의 DTT(1mM 미만)에서도 안정적입니다.이 기능은 고농도의 DTT가 반응에 불리한 반응(예: 실시간 RT-PCR)에 사용하기에 적합합니다.
A응용
이 제품은 다음과 같이 RNA 분해를 피하기 위해 RNase 간섭이 가능한 모든 실험에 널리 사용될 수 있습니다.
1.cDNA의 첫 번째 가닥 합성, RT-PCR, RT-qPCR 등
2.시험관 내 전사/번역(예: 시험관 내 바이러스 복제 시스템) 중에 RNA가 분해되지 않도록 보호합니다.
3.RNA 분리 및 정제 중 RNase 활성 억제.
보관 조건
제품은 -25~-15 ℃에서 보관할 수 있으며 유효기간은 2년입니다.
저장 버퍼
50mM KCl, 20mM HEPES-KOH(pH 7.6, 25℃), 8mM DTT 및 50% 글리세롤.
단위 정의
5ng의 리보뉴클레아제 A 활성을 50% 억제하는 데 필요한 쥐 RNase 억제제의 양을 1단위(U)로 정의했습니다.
단백질의 분자량
쥐 RNase 억제제의 분자량은 50 kDa입니다.
품질 관리
엑소뉴클레아제 활동:
40U의 murine RNase 억제제와 1μg λ-Hind III 분해 DNA를 37℃에서 16시간 동안 처리한 결과 아가로스 겔 전기영동으로 측정한 결과 분해가 발생하지 않았습니다.
엔도뉴클레아제 활성:
40U의 murine RNase 억제제와 1μg λ DNA를 37℃에서 16시간 동안 아가로스 겔 전기영동으로 측정한 결과 분해가 발생하지 않았습니다.
닉킹 활동:
40U의 쥐 RNase 억제제와 1μg의 pBR322를 37℃에서 16시간 동안 처리한 결과 아가로스 겔 전기영동으로 측정한 결과 분해가 발생하지 않았습니다.
RNase 활동:
40U의 쥐 RNase 억제제와 1.6μg MS2 RNA를 37℃에서 4시간 동안 처리한 결과 아가로스 겔 전기영동으로 측정한 결과 분해가 발생하지 않았습니다.
E.대장균 DNA:
E. coli 16S rRNA 유전자좌에 특이적인 프라이머를 사용하여 TaqMan qPCR을 사용하여 E. coli 게놈 DNA의 존재 여부에 대해 40 U의 쥐과 RNase 억제제를 스크리닝합니다.E. coli 게놈 DNA 오염도는 0.1 pg/40 U 이하입니다.
N메모s
1.격렬하게 진동하거나 교반하면 효소가 비활성화됩니다.
2.본 억제제의 최적온도범위는 25-55℃이고, 65℃이상에서는 비활성화된다.
3. RNase H, RNase 1 및 RNase T1의 활성은 쥐의 RNase 억제제에 의해 억제되지 않았습니다.
4. RNase 활성 억제는 넓은 pH 범위(pH 5~9가 모두 활성)에서 나타났으며, pH 7~8에서 가장 높은 활성이 관찰되었다.
5. 리보뉴클레아제는 일반적으로 변성 조건에서도 활성을 유지하므로 리보뉴클레아제와 복합체를 이루는 변성 RNase 억제제 분자를 피하기 위해 주의를 기울여야 합니다.활성 리보뉴클레아제의 방출을 방지하려면 50°C 이상의 온도와 고농도의 요소 또는 기타 변성제를 피해야 합니다.
