마우스 유전형 분석 키트
고양이 번호: HCR2021A
본 제품은 DNA Crude 추출 및 PCR 증폭 시스템을 포함하여 마우스 유전자형의 신속한 식별을 위해 설계된 키트입니다.본 제품은 Lysis Buffer와 Proteinase k에 의한 단순 절단 후 마우스 꼬리, 귀, 발가락 및 기타 조직에서 직접 PCR 증폭에 사용할 수 있습니다.밤새 분해, 페놀-클로로포름 추출 또는 컬럼 정제가 필요하지 않아 간단하고 실험에 소요되는 시간이 단축됩니다.이 제품은 최대 2kb의 표적 단편 증폭과 최대 3쌍의 프라이머를 사용한 다중 PCR 반응에 적합합니다.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix에는 유전적으로 조작된 DNA 중합효소인 Mg가 포함되어 있습니다.2+, dNTPs 및 최적화된 완충 시스템을 통해 높은 증폭 효율과 저해제 내성을 제공하므로 template 및 프라이머를 추가하고 생성물을 1X로 재수화하여 PCR 반응을 수행할 수 있습니다.본 제품으로 증폭된 PCR 산물은 3' 말단에 "A" 염기가 눈에 띄게 나타나 있어 정제 후 바로 TA cloning에 사용할 수 있습니다.
구성요소
| 요소 | 크기 |
| 2×마우스 조직 직접 PCR 믹스 | 5×1.0mL |
| 용해 완충액 | 2×20mL |
| 단백질분해효소 K | 800μL |
보관 조건
제품은 -25~-15℃에서 2년간 보관해야 합니다.Lysis Buffer는 해동 후 단기간 다회 사용 시 2~8℃에서 보관하실 수 있으며, 사용 시 잘 섞어서 사용하실 수 있습니다.
애플리케이션
이 제품은 마우스 녹아웃 분석, 형질전환 검출, 유전자형 분석 등에 적합합니다.
특징
1.간단한 조작: 게놈 DNA를 추출할 필요가 없습니다.
2.폭넓은 적용: 다양한 마우스 조직의 직접 증폭에 적합합니다.
지침
1.게놈 DNA의 방출
1) 용해물 준비
조직 용해물은 용해할 마우스 샘플의 수에 따라 준비하며(조직 용해물은 복용량에 따라 현장에서 준비하고 철저히 혼합하여 사용해야 함), 단일 샘플에 필요한 시약의 비율은 다음과 같습니다.
| 구성요소 | 용량(μL) |
| 단백질분해효소 K | 4 |
| 용해 완충액 | 200 |
2) 샘플 준비 및 용해
권장되는 조직 사용
| 유형조직 | 권장량 |
| 쥐꼬리 | 1-3mm |
| 쥐 귀 | 2-5mm |
| 마우스 발가락 | 1-2개 |
깨끗한 원심분리 튜브에 적당량의 마우스 조직 샘플을 취한 후 각 원심분리 튜브에 신선한 조직 용해물 200μL를 첨가하고 vortex하고 흔든 다음 55℃에서 30분간 배양한 후 98℃에서 3분간 가열합니다.
3) 원심분리
용해물을 잘 흔든 후 12,000rpm에서 5분간 원심분리합니다.상층액은 PCR 증폭을 위한 주형으로 사용될 수 있습니다.보관을 위해 템플릿이 필요한 경우 상등액을 다른 멸균 원심분리 튜브로 옮기고 -20℃에서 2주간 보관합니다.
2.PCR 증폭
2×Mouse Tissue Direct PCR Mix를 -20℃에서 꺼내어 얼음 위에서 해동하고, 거꾸로 섞어 다음 표에 따라 PCR 반응 시스템을 준비합니다(얼음 위에서 작동).
| 구성요소 | 25μL체계 | 50μL체계 | 최종 농도 |
| 2×마우스 조직 직접 PCR 믹스 | 12.5μL | 25μL | 1× |
| 프라이머 1(10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| 프라이머 2(10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
| 분열 제품a | 필요에 따라 | 필요에 따라 |
|
| ddH2O | 최대 25μL | 최대 50μL |
|
메모:
a) 첨가량은 시스템의 1/10을 초과하지 않아야 하며, 너무 많이 첨가할 경우 PCR 증폭이 저해될 수 있습니다.
권장 PCR 조건
| 사이클 단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
| 초기 변성 | 94℃ | 5분 | 1 |
| 변성 | 94℃ | 30초 | 35-40 |
| 가열 냉각a | Tm+3~5℃ | 30초 | |
| 확대 | 72℃ | 30초/kb | |
| 최종 연장 | 72℃ | 5분 | 1 |
| - | 4℃ | 잡고 있다 | - |
메모:
a) 어닐링 온도 : 프라이머의 Tm 값을 참고하여 프라이머의 Tm 값이 작은 +3~5℃로 어닐링 온도를 설정하는 것이 좋습니다.
일반적인 문제 및 해결 방법
1.타겟 스트립 없음
1) 과도한 용해 생성물.일반적으로 시스템의 1/10을 넘지 않는 가장 적절한 양의 템플릿을 선택하십시오.
2) 표본 크기가 너무 큽니다.용해물을 10배로 희석한 다음 증폭하거나 샘플 크기를 줄이고 재용해합니다.
3) 조직 샘플이 신선하지 않습니다.신선한 조직 샘플을 사용하는 것이 좋습니다.
4) 프라이머 품질이 좋지 않습니다.증폭을 위해 게놈 DNA를 사용하여 프라이머 품질을 확인하고 프라이머 디자인을 최적화합니다.
2.비특이적 증폭
1) 어닐링 온도가 너무 낮고 사이클 수가 너무 높습니다.어닐링 온도를 높이고 사이클 수를 줄입니다.
2) 템플릿 농도가 너무 높습니다.증폭 후 템플릿의 양을 줄이거나 템플릿을 10배로 희석하세요.
3) 프라이머 특이성이 좋지 않습니다.프라이머 디자인을 최적화합니다.
노트
1.검체 간 교차 오염을 방지하기 위해 여러 개의 검체 채취 도구를 준비해야 하며, 반복 사용이 필요한 경우 매 검체 채취 후 2% 차아염소산나트륨 용액이나 핵산 세척제로 도구 표면을 세척할 수 있습니다.
2.신선한 마우스 조직을 사용하는 것이 좋으며 증폭 결과에 영향을 미치지 않도록 샘플링 볼륨이 너무 커서는 안 됩니다.
삼.Lysis Buffer는 잦은 동결-해동을 피해야 하며, 단기간 다회 사용 시에는 2~8℃에서 보관할 수 있습니다.저온에 보관할 경우 침전이 발생할 수 있으므로 완전히 용해시킨 후 사용하십시오.
4.PCR Mix는 잦은 동결-해동을 피해야 하며, 단기간 반복 사용 시에는 4℃에서 보관할 수 있습니다.
5.본 제품은 과학적인 실험 연구에만 사용되며, 임상 진단이나 치료에 사용해서는 안 됩니다.
