Bst 2.0 DNA 중합효소(글리세롤 프리)
Bst DNA 중합효소 V2는 Bacillus stearothermophilus DNA 중합효소 I에서 유래되었으며, 이는 5'→3' DNA 중합효소 활성과 강한 사슬 교체 활성을 가지지만, 5'→3' 엑소뉴클레아제 활성은 없습니다.Bst DNA Polymerase V2는 가닥 치환, 등온 증폭 LAMP(루프 매개 등온 증폭) 및 신속한 시퀀싱에 이상적으로 적합합니다.
구성요소
| 요소 | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA 폴리머라제 V2(글리세롤 프리)(8U/μL) | 0.2mL | 1mL | 10mL |
| 10×HC Bst V2 버퍼 | 1.5mL | 2×1.5mL | 3×10mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5mL | 2×1.5mL | 2×10mL |
응용
1.LAMP 등온 증폭
2.DNA 가닥 단일 치환 반응
3.High GC 유전자 시퀀싱
4.나노그램 수준의 DNA 시퀀싱.
보관상태
0°C 미만에서 운송하고 -25°C~-15°C에서 보관하세요.
단위 정의
1단위는 65°C에서 30분 동안 25nmol의 dNTP를 산불용성 물질에 결합시키는 효소의 양으로 정의됩니다.
품질 관리
1.단백질 순도 분석(SDS-PAGE):Bst DNA 폴리머라제 V2의 순도는 Coomassie Blue 검출을 사용한 SDS-PAGE 분석에 의해 측정된 99% 이상입니다.
2.엑소뉴클레아제 활성:최소 8U의 Bst DNA 폴리머라제 V2와 1μg λ-Hind Ⅲ 분해 DNA를 함유한 50μL 반응을 37℃에서 16시간 동안 배양한 결과 검출 가능한 분해가 나타나지 않았습니다.
3.닉카제 활동:최소 8U의 Bst DNA 폴리머라제 V2와 1μg pBR322 DNA를 함유한 50μL 반응을 37°C에서 16시간 동안 배양한 결과 검출 가능한 분해가 나타나지 않았습니다.
4.RNase 활동:최소 8U의 Bst DNA 폴리머라제 V2와 1.6μg MS2 RNA를 함유한 50μL 반응을 37°C에서 16시간 동안 배양한 결과 검출 가능한 분해가 나타나지 않았습니다.
5.대장균 DNA:120 U의 Bst DNA 폴리머라제 V2를 E. coli 16S rRNA 유전자좌에 특이적인 프라이머와 함께 TaqMan qPCR을 사용하여 E. coli 게놈 DNA의 존재 여부를 스크리닝합니다.E. coli 게놈 DNA 오염은 1개 이하입니다.
램프 반응
| 구성요소 | 25μL |
| 10×HC Bst V2 버퍼 | 2.5μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5μL |
| dNTP(각각 10mM) | 3.5μL |
| SYTO™ 16 그린(25×)a | 1.0μL |
| 프라이머 믹스b | 6μL |
| Bst DNA 중합효소 V2(글리세롤 없음)(8 U/uL) | 1μL |
| 주형 | × μL |
| ddH2O | 최대 25μL |
노트:
1) 가.SYTOTM 16 Green (25×): 실험적 필요에 따라 다른 염료를 대체물로 사용할 수 있습니다.
2) ㄴ.프라이머 믹스: 20μM FIP, 20μM BIP, 2.5μM F3, 2.5μM B3, 5μM LF, 5μM LB 및 기타 용량을 혼합하여 얻습니다.
반응 및 조건
1 × HC Bst V2 완충액, 배양 온도는 60°C ~ 65°C입니다.
열 불활성화
80°C, 20분
