RTL 역전사효소
RTL 역전사효소는 3'→5' 엑소뉴클레아제 활성이 부족하고 RNase H 활성을 갖는 RNA 주형 의존적 DNA 중합효소입니다.이 효소는 RNA를 주형으로 사용하여 DNA의 상보적 가닥을 합성할 수 있으며, 이는 특히 RT-LAMP(루프 매개 등온 증폭)의 경우 첫 번째 가닥 cDNA 합성에 적용할 수 있습니다.RTL 역전사 효소 1.0과 비교하여 감도가 크게 향상되고 열 안정성이 더 강하며 65°C에서의 반응이 더 안정적입니다.RTL 역전사효소(글리세롤 없음)를 사용하여 동결건조 제제, 동결건조 RT-LAMP 시약 등을 제조할 수 있습니다.
단위 정의
하나의 장치는 폴리(A)·올리고(dT)25를 주형-프라이머로 사용하여 50°C에서 20분 안에 1nmol의 dTTP를 산 침전성 물질에 통합합니다.
구성요소
| 요소 | HC5008A-01 | HC5008A-02 | HC5008A-03 |
| RTL 역전사효소(글리세롤 무첨가)(15U/μL) | 0.1mL | 1mL | 10mL |
| 10×HC RTL 버퍼 | 1.5mL | 4×1.5mL | 5×10mL |
| MgSO4(100mM) | 1.5mL | 2×1.5mL | 3×10mL |
보관상태
0°C 미만에서 운송하고 -25°C~-15°C에서 보관하세요.
품질 관리
- 잔여 활동E엔도뉴클레아제:1 μg의 λDNA와 15 단위의 RTL2.0을 포함하는 50 μL 반응은 37℃에서 16시간 동안 배양되었으며 겔 전기영동에 의한 음성 대조군과 동일한 패턴을 나타냅니다.
- 잔여 활동엑소뉴클레아제:1 μg의 Hind Ⅲ 소화된 λDNA와 15 단위의 RTL2.0을 포함하는 50 μL 반응은 37℃에서 16시간 동안 배양되었으며 겔 전기영동에 의한 음성 대조군과 동일한 패턴을 나타냅니다.
- 잔여 활동니카제:37°C에서 4시간 동안 배양된 1μg의 초나선형 pBR322와 15단위의 RTL2.0을 포함하는 50μL 반응은 겔 전기영동에 의한 음성 대조군과 동일한 패턴을 보여줍니다.
- 잔여 활동RNase:0.48 μg의 MS2 RNA와 15 단위의 RTL2.0을 포함하는 10 μL 반응은 37°C에서 4시간 동안 배양되었으며 겔 전기영동에 의한 음성 대조군과 동일한 패턴을 보여줍니다.
- 대장균 gDNA:측정대장균특정 HCD 검출 키트, RTL2.0 15개 단위에는 1개 미만 포함대장균게놈.
반응 설정
cDNA 합성 프로토콜
| 구성요소 | 용량 |
| 템플릿 RNA | 선택 과목 |
| Oligo(dT) 18~25(50uM) 또는 Random Primer mix(60uM) | 2μL |
| dNTP 믹스(각 10mM) | 1μL |
| RNase 억제제(40U/uL) | 0.5μL |
| RTL 역전사효소 2.0(15U/uL) | 0.5μL |
| 10×HC RTL 버퍼 | 2μL |
| 뉴클레아제가 없는 물 | 최대 20μL |
노트:
1) Total RNA의 권장용량은 1ng~1μg입니다.
2) mRNA의 권장용량은 50ng~100ng이다.
써모-루틴을 위한 사이클링 조건 반응:
| 온도(°C) | 시간 |
| 25°Ca | 5분 |
| 55°C | 10분b |
| 80°C | 10분 |
노트:
1) Random Primer Mix를 사용하는 경우 25°C에서 배양 단계를 진행합니다.
2) 타겟 프라이머 믹스를 사용하는 경우, 55°C에서 10~30분 동안 배양 단계를 진행합니다.
RT-램프 프로토콜
| 구성요소 | 용량 | 최종 농도 |
| 템플릿 RNA | 선택 과목 | ≥10 사본 |
| dNTP 믹스(10mM) | 3.5μL | 1.4mM |
| FIP/BIP 프라이머(25×) | 1μL | 1.6μM |
| F3/B3 프라이머(25×) | 1μL | 0.2μM |
| LoopF/LoopB 프라이머(25×) | 1μL | 0.4μM |
| RNase 억제제(40U/μL) | 0.5μL | 20U/반응 |
| RTL 역전사효소 2.0(15U/μL) | 0.5μL | 7.5 U/반응 |
| Bst V2 DNA 중합효소(8U/μL) | 1μL | 8U/반응 |
| MgSO4(100mM) | 1.5μL | 6mM(총 8mM) |
| 10×HC RTL 버퍼(또는 10×HC Bst V2 버퍼) | 2.5μL | 1 × (2mM Mg2+) |
| 뉴클레아제가 없는 물 | 최대 25μL | - |
노트:
1) vortexing하고 원심분리하여 짧게 섞어서 수집한다.65°C에서 1시간 동안 항온 배양합니다.
2) 두 버퍼는 상호 운용 가능하며 구성이 동일합니다.
노트
1. 본 제품은 -20 °C에서 보관 시 흰색 고체를 형성합니다.-20°C에서 꺼내어 얼음 위에 10분 정도 넣어주세요.녹인 후 흔들어서 섞어서 사용하시면 됩니다.
2. cDNA 생성물은 -20°C 또는 -80°C에 보관하거나 PCR 반응에 즉시 사용할 수 있습니다.
3.RNase 오염을 방지하기 위해 실험 장소를 깨끗하게 유지하시고, 작업 중에는 깨끗한 장갑과 마스크를 착용하시기 바랍니다.
