온도에 민감한 UNG
온도 민감성 UNG(TS-UNG)은 E. coli에서 재조합 발현을 통해 얻어집니다.이 효소는 우라실을 함유한 단일 및 이중 가닥 DNA에서 유리 우라실의 방출을 촉매하며 RNA에 대해서는 비활성화됩니다.E. coli 유전자 유래의 기존 UNG 효소와 비교하여 TS-UNG 효소는 저온(20℃~37℃)에서 더 높은 활성을 가지며 온도에 민감하고 쉽게 비활성화(50℃)되어 dUTP 함유 증폭의 분해를 피합니다. 기존 UNG 효소의 불활성화 이후 남아 있을 수 있는 잔류 활성으로 인해 실온에서 제품이 손상될 수 있습니다.따라서 TS-UNG 효소는 PCR 오염방지 반응에 적합할 뿐만 아니라 RT-PCR 증폭 프로그램과도 잘 맞아서 RT-PCR 오염방지 반응에도 사용할 수 있습니다.
권장 애플리케이션
오염방지 증폭
보관상태
-20°C로 장기간 보관시에는 잘 섞어서 사용하시고, 잦은 동결-해동은 피해주세요.
저장 버퍼
20mM Tris-HCl(pH 7.5), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 안정제, 50% 글리세롤.
단위 정의
dU 염기를 포함하는 단일 가닥 DNA 1μg을 37°C에서 1시간 동안 분해하는 데 필요한 효소의 양은 1 활성 단위(U)입니다.
품질 관리
1.SDS-PAGE 전기영동 순도 98% 이상
2.분해활성, 배치간 제어, 안정성
3.외인성 뉴클레아제 활성 없음, 외인성 엔도뉴클레아제 또는 엑소뉴클레아제 오염 없음.
지침
| 구성요소 | 용량(μL) | 최종 농도 |
| 10 × PCR 버퍼(dNTP 없음, Mg²+무료) | 5 | 1× |
| dUTP(dCTP, dGTP, dATP) | - | 200μM |
| dUTP(dTTP 대체) | - | 200-600μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8μL | 1-4mM |
| 5U/μL Taq | 0.25 | 1.25U |
| 1U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5U(0.1-0.5U) |
| 25 × 프라이머 믹스ㅏ | 2 | 1× |
| 주형 | - | <1μg/반응 |
| ddH2O | 50까지 | - |
참고: a: qPCR/qRT-PCR에 사용되는 경우 형광 프로브를 반응 시스템에 추가해야 합니다.일반적으로 최종 프라이머 농도가 0.2μM이면 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.반응 성능이 좋지 않은 경우 프라이머 농도를 0.2-1 μM 범위에서 조정할 수 있습니다.일반적으로 프로브 농도는 0.1-0.3 μM 범위에서 최적화됩니다.최적의 프라이머와 프로브 조합을 찾기 위해 농도 구배 실험을 수행할 수 있습니다.
노트
1.TS-UNG 효소의 최적 반응온도는 상대적으로 낮으며 20℃~37℃ 범위에서 최적화할 수 있으며, 효소의 투여량과 반응시간은 0.1~0.5 U, 5~ 10 분;역전사 과정에서 효소가 비활성화될 수 있습니다.
2.오염을 방지하기 위해 PCR 및 RT-PCR에 적합합니다.
3.잦은 동결-해동을 피하고 온도 변화가 큰 곳에 노출되지 않도록 하십시오.
4.증폭되는 유전자마다 dUTP의 활용 효율과 UNG 효소에 대한 민감도가 다르기 때문에 UNG 시스템을 사용하면 검출 민감도가 감소하는 경우 반응 시스템을 조정하고 최적화해야 합니다. 기술 지원이 필요한 경우 문의하시기 바랍니다. 우리 회사.
