프로테이나제 K mNGS(액체)
Proteinase K는 광범위한 기질 특이성을 지닌 안정적인 세린 프로테아제입니다.이는 세제가 있는 경우에도 자연 상태에서 많은 단백질을 분해합니다.결정 및 분자 구조 연구의 증거에 따르면 효소는 활성 부위 촉매 트라이어드(Asp)가 있는 서브틸리신 계열에 속합니다.39-그의69-세르224).주요 절단 부위는 차단된 알파 아미노 그룹을 갖는 지방족 및 방향족 아미노산의 카르복실 그룹에 인접한 펩티드 결합입니다.광범위한 특이성을 위해 일반적으로 사용됩니다.이 단백질분해효소 K는 mNGS를 위해 특별히 고안되었습니다.다른 단백질분해효소 K와 비교하여 동일한 효소 성능으로 핵산 오염이 훨씬 적으므로 다운스트림 mNGS 적용을 더 잘 보장할 수 있습니다.
보관 조건
2년 동안 2-8℃
사양
| 모습 | 무색~엷은 갈색의 액체 |
| 활동 | ≥800U/ml |
| 단백질 농도 | ≥20mg/ml |
| 니카제 | 감지되지 않음 |
| DNase | 감지되지 않음 |
| RNase | 감지되지 않음 |
속성
| EC 번호 | 3.4.21.64(Tritirachium 앨범의 재조합체) |
| 등전점 | 7.81 |
| 최적의 pH | 7.0- 12.0 그림 1 |
| 최적의 온도 | 65 ℃ 그림 2 |
| pH 안정성 | pH 4.5~12.5(25℃, 16시간) 그림 3 |
| 열 안정성 | 50 ℃ 이하 (pH 8.0, 30분) 그림 4 |
| 보관 안정성 | 25℃에서 12개월 동안 90% 이상 활성 |
| 활성제 | SDS, 요소 |
| 억제제 | 디이소프로필 플루오로포스페이트;페닐메틸설포닐 플루오라이드 |
응용
1. 유전자진단키트
2. RNA 및 DNA 추출 키트
3. 조직 내 비단백질 성분 추출, DNA 등 단백질 불순물 분해백신 및 헤파린 제조
4. 펄스 전기영동에 의한 염색체 DNA 준비
5. 웨스턴 블롯
6. 효소적 글리코실화 알부민 시약 체외 진단
지침
사용 및 계량 시에는 보호장갑과 보안경을 착용하고, 사용 후에는 환기를 잘 시켜 주십시오.이 제품은 피부 알레르기 반응과 심각한 눈 자극을 일으킬 수 있습니다.흡입하면 알레르기나 천식 증상, 호흡곤란을 일으킬 수 있습니다.호흡기 자극을 일으킬 수 있음.
단위 정의
1 단위(U)는 1μmol을 생산하기 위해 카제인을 가수분해하는 데 필요한 효소의 양으로 정의됩니다.다음 조건에서 분당 티로신.
시약 준비
시약 I: 우유 카세인 1g을 0.1M 인산나트륨용액(pH 8.0) 50ml에 녹인 후 65~70℃의 물에서 15분간 방치한 후 교반하여 녹인 후 물로 냉각하고 수산화나트륨으로 pH 8.0으로 조정하고 정량하였다. 100ml.
시약 II: 0.1M 트리클로로아세트산, 0.2M 아세트산 나트륨, 0.3M 아세트산.
시약 III: 0.4M Na2CO3해결책.
시약 IV: 순수에 5배 희석한 포린트 시약.
시약 V: 효소 희석제: 0.1M 인산나트륨 용액(pH 8.0).
시약 VI: 티로신 용액: 0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml 티로신을 0.2로 용해M HCl.
절차
1. 시약Ⅰ 0.5ml를 37℃로 예열하고, 효소용액 0.5ml를 첨가하여 잘 섞은 후 20℃에서 배양한다.10분 동안 37℃.
2. 시약 II 1ml를 첨가하여 반응을 멈추고 잘 섞은 후 30분 동안 배양을 계속합니다.
3. 반응액을 원심분리한다.
4. 상청액 0.5ml를 취하여 시약 III 2.5ml, 시약 IV 0.5ml를 첨가하고 잘 섞은 후 37℃에서 배양한다.30분 동안.
5. 외경660OD로 결정되었습니다1;빈 대조군: 0.5ml 시약 V를 사용하여 효소를 대체합니다.OD를 결정하는 솔루션660OD로2, ΔOD=OD1-OD2.
6. L-티로신 표준곡선: 5mL 원심분리관에 서로 다른 농도의 L-티로신 용액 0.5mL, 시약 III 2.5mL, 시약 IV 0.5mL, 37℃에서 30분간 배양, OD 검출660서로 다른 농도의 L-티로신에 대해 표준 곡선 Y=kX+b를 얻었습니다. 여기서 Y는 L-티로신 농도이고, X는 OD입니다.600.
계산
2: 반응액의 총 부피(mL)
0.5: 효소액의 부피(mL)
0.5: 발색 측정에 사용되는 반응액량(mL)
10: 반응시간(분)
Df: 희석배수
C: 효소농도(mg/mL)
참고자료
1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.
2. Wieger U & Hilz H. Biochem.생물 물리학.결의안.커뮤니케이터(1971);44:513.
3. 힐츠, H.외.,유로.J. Biochem.(1975);56:103-108.
4. 샘브룩 제이et 알., 분자 복제: 실험실 매뉴얼, 2판, Cold Spring Harbor실험실 출판부, 콜드 스프링 하버(1989).
피규어
무화과.1 최적 pH
100mM 완충액: pH6.0-8.0, Na-인산염;pH8.0-9.0, 트리스-HCl;pH9.0-12.5, 글리신-NaOH.효소 농도:1mg/mL
그림 2 최적 온도
20mM K-인산염 완충액 pH 8.0에서의 반응.효소 농도: 1 mg/mL
그림 3 pH 안정
25℃, 50mM 완충액으로 16시간 처리: pH 4.5-5.5, 아세트산;pH 6.0-8.0, Na-인산염;pH 8.0-9.0, 트리스-HCl.pH 9.0-12.5, 글리신-NaOH.효소 농도: 1 mg/mL
그림 4 열 안정
50mM Tris-HCl 완충액, pH 8.0으로 30분 처리.효소 농도: 1 mg/mL
그림 5 보관 안정ty at 25℃
