DNA 추출 미니 키트
이 키트는 최적화된 완충 시스템과 실리카겔 컬럼 정제 기술을 채택하여 다양한 농도의 TAE 또는 TBE 아가로스 겔에서 70bp – 20kb의 DNA 단편을 회수할 수 있습니다.DNA 흡착 컬럼은 고염 조건에서 DNA를 특별히 흡착할 수 있습니다.또한, PCR 산물, 효소반응 시스템, 기타 방법으로 얻은 가공되지 않은 DNA 산물로부터 DNA 단편을 직접 정제할 수 있으며, 단백질, 기타 유기화합물, 무기염 이온, 올리고뉴클레오티드 프라이머 등의 불순물도 제거할 수 있다.10-15분 이내에 정화가 완료될 수 있도록 보장할 수 있습니다.정제된 DNA는 ligation, 형질전환, 효소 분해, in vitro 전사, PCR, sequencing, microinjection 등에 직접 사용할 수 있습니다.
보관 조건
-15 ~ -25℃에 보관하고 실온에서 운송하세요.
구성요소
| 구성요소 | (100rxns) |
| 완충 GDP | 80ml |
| 버퍼 GW | 2×20ml |
| 용출 버퍼 | 20ml |
| FastPure DNA 미니 컬럼-G | 100 |
완충 GDP:DNA 결합 완충액.
버퍼 GW:세척 완충액;사용하기 전에 병에 표시된 양만큼 무수 에탄올을 첨가하십시오.
용출 완충액:용출.
FastPure DNA 미니 컬럼-G:DNA 흡착 컬럼.
수집 튜브 2ml:여과액 수집 튜브.
준비된 재료
1.5ml 멸균 튜브, 무수 에탄올 및 이소프로판올(DNA 단편이 100bp 이하인 경우 1볼륨 추가)
이소프로판올을 1볼륨 젤로), 수조.
실험 과정
사용 전 태그에 표시된 대로 Buffer GW를 희석하기 위해 에탄올 80ml를 첨가하고 실온에서 보관하십시오.
기구
1. PCR 반응 용액
겔 추출 방식: 동량 완충액 추가 GDP PCR 반응 용액 회수 방식:5배의 볼륨 버퍼 추가
2. GDP 젤의 부피를 계산합니다(100 μ나는 100mg과 같습니다 )
젤을 녹인다
3. 50~55도 예열℃
4. 바인딩 워시
300μL의 버퍼 GDP 추가*
700 μL의 버퍼 GW 추가
700 μL의 버퍼 GW 추가
5. 용출
20 – 30μL의 Elution Buffer 또는 탈이온수를 추가합니다.
참고* 이 단계 없이 PCR 반응액 회수
젤 추출 프로그램
1. DNA 단편을 분별하기 위한 DNA 전기영동 후, UV 조명 하에서 아가로스 젤에서 DNA 단편의 단일 줄무늬를 잘라냅니다.겔의 겉보기 수분을 흡수하고 여분의 아가로스를 최대한 제거하여 겔 슬라이스의 크기를 최소화하기 위해 흡수지를 사용하는 것이 좋습니다.젤 슬라이스의 무게를 측정하여(마이크로 원심분리기 튜브 제외) 부피를 계산합니다. 밀도가 1g/ml라고 가정할 때 100mg 젤 슬라이스의 부피는 약 100μL입니다.
2. 동일한 부피의 Buffer GDP를 첨가하고 50~55℃에서 7~10분간 배양합니다(겔 크기에 따라 겔이 완전히 용해될 때까지 배양 시간을 조정합니다).배양 중에 튜브를 2회 뒤집습니다.
Δ 1~3배량의 Buffer GDP를 추가해도 DNA 회수 효율에는 영향을 미치지 않습니다.회수할 DNA 단편이 100bp 미만인 경우 3부피의 Buffer GDP를 추가해야 합니다.젤 조각이 완전히 녹으면 이소프로판올 1배를 넣고 잘 섞은 후 다음 단계로 진행합니다.
3. 잠시 원심분리하여 샘플을 튜브 바닥으로 가져온 후 FastPure DNA Mini Columns-G를 수집 튜브에 2ml 삽입하고 조심스럽게 1회에 한 번 최대 700μL의 용액을 옮깁니다.
여과 컬럼에 도달할 때까지 12,000rpm(13,800Xg)에서 30-60초 동안 원심분리합니다.
4. 여액을 버리고 300 μL의 Buffer GDP를 컬럼에 추가하고 실온에서 1분 동안 배양한 후 12,000 rpm(13,800 X g)에서 30-60초 동안 원심분리합니다.
5. 여액을 버리고 700μL의 Buffer GW(무수 에탄올이 미리 첨가되었는지 확인하십시오!)를 컬럼에 추가하고 12,000rpm(13,800Xg)에서 30-60초 동안 원심분리합니다.
Δ 흡착 컬럼 벽 주위에 Buffer GW를 추가하거나, Buffer GW 후면 커버를 추가하고 거꾸로 2~3회 혼합하여 튜브 벽에 부착된 염분을 완전히 씻어내도록 하십시오.
6. 5단계를 반복합니다.
Δ Buffer GW로 두 번 플러싱하면 염이 완전히 제거되고 후속 실험에 대한 영향을 제거할 수 있습니다.
7. 여액을 버리고 빈 컬럼을 12,000rpm(13,800Xg)에서 2분간 원심분리합니다.
8. 깨끗한 1.5 ml 마이크로원심분리 튜브에 컬럼을 삽입하고 컬럼 막 중앙에 Elution Buffer 20 - 30 μL를 첨가한 후 2분간 배양한 후 12,000 rpm (13,800 X g)에서 1분간 원심분리합니다.컬럼을 버리고 얻은 DNA를 -20에 저장합니다.
Δ 8단계의 상등액을 컬럼으로 옮겨 다시 용출하고 용출 완충액을 55(DNA 단편 >3kb인 경우)로 예열하는 것이 회수 효율을 높이는 데 도움이 될 수 있습니다.
PCR 산물 회수 프로그램
이 프로토콜은 PCR 산물, 효소 반응 시스템 및 기타 DNA 원유 산물(유전 DNA 포함)에서 DNA 단편을 정제하는 데 적용됩니다.이 솔루션은 다양한 뉴클레오티드, 프라이머, 프라이머 다이머, 염분자, 효소 및 기타 불순물을 효율적으로 제거할 수 있습니다.
1. PCR 산물, 효소반응액, 기타 DNA 조산물을 간단히 원심분리합니다.피펫으로 부피를 추정하고 멸균된 1.5ml 또는 2ml 튜브로 옮깁니다.볼륨이 최대 100μL이 될 때까지 ddH2O를 추가합니다.농도가 높은 genomic DNA의 경우 ddH2O로 300μL까지 희석하면 회수 효율을 높이는 데 도움이 됩니다.
2. 5개 부피의 Buffer GDP를 첨가하고 뒤집거나 볼텍싱하여 완전히 혼합합니다.관심 있는 DNA 단편이 >100bp인 경우 에탄올을 1.5부피(샘플 + 버퍼 GDP) 추가해야 합니다.
3. 컬럼을 수집 튜브에 다시 삽입하고 혼합물을 컬럼으로 옮기고 12,000rpm(13,800 ×g)에서 30~60초 동안 원심분리합니다.혼합 용액의 부피가 700 µL보다 큰 경우 흡착 컬럼을 다시 수집 튜브에 넣고 남은 용액을 흡착 컬럼으로 옮긴 후 12,000 rpm (13,800 × g)에서 30 – 60초 동안 원심분리합니다.
4. 다음 수행은 08-1/Gel 추출 프로그램의 5~8단계를 참조합니다.
응용
다양한 농도의 TAE 또는 TBE 아가로스 겔;다양한 방법으로 얻은 PCR 산물, 효소 반응 시스템 또는 기타 조 DNA 산물.회수된 파편의 범위는 다음과 같습니다.70bp -20kb.
노트
연구용으로만 사용하세요.진단 절차에 사용하지 마십시오.
1. 사용 전 태그에 표시된 대로 Buffer GW를 희석하기 위해 에탄올 80ml를 첨가하고 실온에서 보관하십시오.
2. 저온 보관 시 Buffer GDP가 침전되기 쉬운 경우 일정 기간 실온에 방치한 후 사용 가능합니다.필요하다면 37℃ 수조에서 침전물이 완전히 용해될 때까지 예열한 후 혼합하여 사용할 수 있다.
3. 미리 수조 온도를 50~55℃로 설정해 주세요.
4. 08-1/Gel 추출 프로그램 1단계에서 gel Slice의 크기를 최소화하면 용해 시간이 크게 단축되고 회수 효율이 높아집니다. (선형화된 DNA는 지속적으로 고온에 노출되면 쉽게 가수분해됩니다.)자외선은 DNA 손상을 일으킬 수 있으므로 DNA 젤을 오랫동안 UV에 노출시키지 마십시오.
5. 08-1/Gel 추출 프로그램 2단계에서 젤을 완전히 녹이십시오. 그렇지 않으면 DNA 회수 효율에 심각한 영향을 미칩니다.
6. Elution Buffer 또는 ddH2O를 55℃로 예열하면 DNA 용출 효율을 높이는 데 도움이 됩니다.2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0 – 8.5의 용리액에 DNA를 보관하는 것이 좋습니다.
