프로테이나제 K NGS(분말)
고양이 번호: HC4507A
NGS 프로테아제 K는 효소 활성이 높고 기질 특이성이 넓은 안정적인 세린 프로테아제입니다. 이 효소는 소수성 아미노산, 황 함유 아미노산, 방향족 아미노산의 C 말단에 인접한 에스테르 결합과 펩타이드 결합을 우선적으로 분해합니다.따라서 단백질을 짧은 펩타이드로 분해하는 데 자주 사용됩니다.NGS 프로테아제 K는 Asp 단백질과 함께 전형적인 세린 프로테아제입니다.39-그의69-세르224세린 프로테아제 특유의 촉매 삼원조이며, 촉매 중심은 토우 Ca로 둘러싸여 있습니다.2+안정화를 위한 결합 부위로 광범위한 조건에서 높은 효소 활성을 유지합니다.
사양
| 모습 | 백색 내지 황백색의 무정형 분말, 동결건조됨 |
| 특정 활동 | ≥40U/mg 고체 |
| DNase | 감지되지 않음 |
| RNase | 감지되지 않음 |
| 바이오버든 | ≤50CFU/g 고체 |
| 핵산 잔류물 | <5pg/mg 고체 |
속성
| 원천 | 트리티라키움 앨범 |
| EC 번호 | 3.4.21.64(Tritirachium 앨범의 재조합체) |
| 분자 무게 | 29kDa(SDS-PAGE) |
| 등전점 | 7.81 그림 1 |
| 최적의 pH | 7.0-12.0 (모두 높은 활동 수행) 그림 2 |
| 최적의 온도 | 65℃ 그림3 |
| pH 안정성 | pH 4.5-12.5 (25℃,16h) 그림4 |
| 열 안정성 | 50℃ 이하 (pH 8.0, 30분) 그림5 |
| 보관 안정성 | 25℃에서 12개월간 보관 그림6 |
| 활성제 | SDS, 요소 |
| 억제제 | 디이소프로필 플루오로포스페이트;벤질설포닐 플루오라이드 |
보관 조건
동결건조된 분말을 -25~-15℃에서 오랫동안 빛을 피하여 보관하십시오.녹인 후, 단기보존할 경우에는 빛을 피하여 2~8℃, 장기보존할 경우에는 적당량에 나누어 차광하여 -25~-15℃에 보관한다.
지침
사용 및 계량 시에는 보호장갑과 보안경을 착용하고, 사용 후에는 환기를 잘 시켜 주십시오.이 제품은 피부 알레르기 반응과 심각한 눈 자극을 일으킬 수 있습니다.흡입하면 알레르기나 천식 증상, 호흡곤란을 일으킬 수 있습니다.호흡기 자극을 일으킬 수 있음.
단위 정의
NGS 프로테아제 K 1단위는 표준 측정 조건에서 카제인을 1μmol L-티로신으로 가수분해하는 데 필요한 효소의 양으로 정의됩니다.
시약 준비
| 시약 | 제조업체 | 목록 |
| 카제인 기술소 우유에서 | 시그마 알드리치 | C7078 |
| NaOH | 시노팜케미칼(주)시약 | 10019762 |
| NaH2PO4·2시간2O | 시노팜케미칼(주)시약 | 20040718 |
| Na2HPO4 | 시노팜케미칼(주)시약 | 20040618 |
| 삼염화초산 | 시노팜케미칼(주)시약 | 80132618 |
| 아세트산나트륨 | 시노팜케미칼(주)시약 | 10018818 |
| 아세트산 | 시노팜케미칼(주)시약 | 10000218 |
| HCl | 시노팜케미칼(주)시약 | 10011018 |
| 탄산나트륨 | 시노팜케미칼(주)시약 | 10019260 |
| 폴린-페놀 | Sangon Biotech (상하이)유한 회사, | A500467-0100 |
| L-티로신 | 시그마 | 93829 |
시약 I:
기질: 소 우유 용액의 1% 카세인: 소 우유 카세인 1g을 0.1M 인산나트륨 용액(pH 8.0) 50ml에 녹인 다음 65~70°C의 수조에서 15분간 가열하고 저어 용해한 다음 물로 냉각하고 다음과 같이 조정합니다. 수산화나트륨을 pH 8.0으로 하여 100ml로 희석한다.
시약 II:
TCA 용액: 0.1M 트리클로로아세트산, 0.2M 아세트산나트륨 및 0.3M 아세트산(트리클로로아세트산 1.64g + 아세트산나트륨 1.64g + 아세트산 1.724mL를 차례로 계량하고 탈이온수 50mL를 첨가하고 HCl을 사용하여 pH 4.03으로 조정하고 100ml).
시약 III:
0.4m 탄산나트륨 용액(무수탄산나트륨 4.24g을 달아 물 100mL에 녹임)
시약 IV:
폴린 페놀 시약: 탈이온수로 5배 희석합니다.
시약 V:
효소 희석제: 0.1M 인산나트륨 용액, pH 8.0.
시약 VI:
L-티로신 표준용액:0, 0.005, 0.025, 0.05, 0.075, 0.1, 0.25 umol/ml L-티로신을 0.2M HCl에 용해시켰다.
절차
1. UV-Vis 분광 광도계를 켜고 광도 측정을 선택합니다.
2. 파장을 660nm로 설정합니다.
3. 수조를 켜고 온도를 37℃로 설정한 후 3~5분 동안 온도가 변하지 않도록 합니다.
4. 2mL 원심분리용 튜브에 0.5mL 기질을 넣고 37℃ 수조에서 10분간 예열한다.
5. 예열된 원심분리용 튜브에 희석된 효소용액 0.5mL를 10분간 추출한다.효소 희석제를 빈 그룹으로 설정합니다.
6. 반응 직후 TCA 시약 1.0mL를 첨가합니다.잘 혼합하고 수조에서 30분 동안 배양합니다.
7. 반응액을 원심분리한다.
8. 지정된 순서대로 다음 구성 요소를 추가합니다.
| 시약 | 용량 |
| 상청액 | 0.5mL |
| 0.4M 탄산나트륨 | 2.5mL |
| 폴린 페놀 시약 | 0.5mL |
9. 잘 섞은 후 37℃ 수조에서 30분간 배양합니다.
10. 외경660OD로 결정되었습니다1;빈 대조군: 효소 희석액을 사용하여 효소 용액을 대체하여 OD를 결정합니다.660OD로2, ΔOD=OD1-OD2.
11. L-티로신 표준곡선: 서로 다른 농도의 L-티로신 용액 0.5mL, 0.4M 탄산나트륨 2.5mL, Folin 페놀 시약 0.5mL를 5mL 원심분리관에 넣고 37℃에서 30분 동안 배양한 후 OD를 검출합니다.660다양한 농도의 L-티로신에 대해 표준 곡선 Y=kX+b를 얻었습니다. 여기서 Y는 L-티로신 농도이고, X는 OD입니다.600.
계산
2: 반응액의 총 부피(mL)
0.5: 효소액의 부피(mL)
0.5: 발색 측정에 사용되는 반응액량(mL)
10: 반응시간(분)
Df: 희석배수
C: 효소농도(mg/mL)
피규어
그림 1 DNA 잔기
| 견본 | 애비뉴 C4 | 핵산 회복량(pg/mg) | 회복(%) | 총 핵 산성( 페이지/mg) |
| PRK | 24.66 | 2.23 | 83% | 2.687 |
| PRK+성병2 | 18.723 | 126.728 | — | — |
| 성병1 | 12.955 |
— |
— |
— |
| 성병2 | 16 | |||
| 성병3 | 19.125 | |||
| 성병4 | 23.135 | |||
| 성병5 | 26.625 | |||
| RNA가 없는 H2O | 분명치 않은 | — | — | — |
그림 2 최적 pH
그림 3 최적 온도
그림 4 pH 안정성
그림 5 열 안정성
그림 6 25℃에서의 보관 안정성
