우라실 DNA 글리코실라제
우라실-DNA 글리코실라제(UNG 또는 UDG)는 분자량이 25kDa인 대장균의 재조합 클론입니다.우라실이 함유된 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA로부터 유리 우라실의 방출을 촉매하며, RNA에 대해 불활성이며 PCR 증폭 산물의 오염을 방지하는 데 사용할 수 있습니다.작용 원리는 PCR 반응에서 dTTP를 dUTP로 대체하여 dU 염기를 포함하는 PCR 증폭 산물이 생성되면 효소가 단일 가닥과 이중 가닥의 U 염기의 글리코시드 결합을 선택적으로 끊을 수 있다는 사실에 기초합니다. DNA를 분해하고 PCR 증폭산물을 분해합니다.
권장 애플리케이션
오염방지 증폭
보관상태
-20°C로 장기간 보관시에는 잘 섞어서 사용하시고, 잦은 동결-해동은 피해주세요.
저장 버퍼
20mM Tris-HCl(pH 8.0), 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 안정제, 50% 글리세롤.
단위 정의
dU 염기를 포함하는 단일 가닥 DNA 1μg을 37°C에서 1시간 동안 분해하는 데 필요한 효소의 양은 1단위입니다.
품질 관리
1.SDS-PAGE 전기영동 순도 98% 이상
2.증폭감도, 배치간 제어, 안정성
3.1U의 UNG를 50℃에서 2분간 처리한 후, 103개 이하의 U를 함유한 주형은 완전히 분해되어 증폭산물이 생성되지 않습니다.
4.외인성 뉴클레아제 활성 없음
지침
| 구성요소 | 용량(μL) | 최종 농도 |
| 10 × PCR 버퍼(dNTP 없음, Mg²+무료) | 5 | 1× |
| dUTP(dCTP, dGTP, dATP) | - | 200μM |
| dUTP(dTTP 대체) | - | 200-600μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8μL | 1-4mM |
| 5U/μL Taq | 0.25 | 1.25U |
| 5U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25U(0.1-0.5) |
| 25 × 프라이머 믹스ㅏ | 2 | 1× |
| 주형 | - | <1μg/반응 |
| ddH2O | 50까지 | - |
메모: a: qPCR/qRT-PCR에 사용하는 경우 형광 프로브를 반응 시스템에 추가해야 합니다.일반적으로 최종 프라이머 농도가 0.2μM이면 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.반응 성능이 좋지 않은 경우 프라이머 농도를 0.2-1 μM 범위에서 조정할 수 있습니다.일반적으로 프로브 농도는 0.1-0.3 μM 범위에서 최적화됩니다.최적의 프라이머와 프로브 조합을 찾기 위해 농도 구배 실험을 수행할 수 있습니다.
노트
1.UNG 효소를 사용하면 PCR 증폭 반응 전 반응 시스템에서 오염된 dUTP 증폭 산물을 제거한 후, 산물 오염으로 인한 위양성 결과를 방지할 수 있습니다.
2.Anti-contamination PCR 반응에 사용되는 UNG 효소의 최적 온도는 일반적으로 50℃에서 2분입니다.비활성화 조건은 95℃에서 5분입니다.
3.잦은 동결-해동을 피하고 온도 변화가 큰 곳에 노출되지 않도록 하십시오.
4.증폭되는 유전자마다 dUTP의 활용 효율과 UNG 효소에 대한 민감도가 다르기 때문에 UNG 시스템을 사용하면 검출 민감도가 감소하는 경우 반응 시스템을 조정하고 최적화해야 합니다. 기술 지원이 필요한 경우 문의하시기 바랍니다. 우리 회사.
