Superstart qPCR Premix plus-UNG
고양이 번호: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG는 동결건조 공정용으로 특별히 개발된 프로브 기반 검출을 사용하는 Real Time PCR 정성 및 정량 반응용으로 설계된 특수 시약입니다.Taq 효소 활성이 상온에서 밀봉되어 있는 새로운 핫스타트 효소인 Hotstart Taq plus(DG)를 함유하여 저온 조건에서 프라이머 비특이적 어닐링이나 프라이머 이량체 형성으로 인한 비특이적 증폭을 효과적으로 억제하여 향상된 성능을 제공합니다. 증폭 반응의 특이성.이 시약은 최적화된 qPCR 특이적 완충액과 UNG/dUTP 오염 방지 시스템을 사용하여 신속한 hot-starting을 달성하여 qPCR 반응의 효율성과 감도를 크게 향상시킵니다.광범위한 정량 영역에서 우수한 표준 곡선을 얻을 수 있으며 정확하게 정량을 수행하여 잔류 PCR 산물이나 에어로졸 오염으로 인한 위양성 증폭을 효과적으로 방지할 수 있습니다.이 시약은 Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche 등 제조업체의 대부분의 형광 정량 PCR 기기와 호환되며 동결건조 형태에서 우수한 안정성을 나타냅니다.
시약 구성
1. 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+무료) (DG)
2. 250mM MgCl2
3. 4×동액보호제(선택사항)
보관 조건
-20℃에서 장기 보관;4℃에서 최대 3개월간 보관 가능합니다.사용 전 잘 섞어서 사용하세요반복적인 동결과 해동을 피하십시오.
사이클링 프로토콜
| 절차 | 온도 | 시간 | 주기 |
| 소화 | 50℃ | 2분 | 1 |
| 중합효소 활성화 | 95℃ | 1~5분 | 1 |
| 변성 | 95℃ | 10~20초 | 40-50 |
| 어닐링 및 연장 | 56~64℃ | 20~60초 | 40-50 |
qPCR 액체 반응 Sy줄기 준비
|
구성 |
25μL 용량 |
50μL 용량 |
최종 농도 |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(마그네슘2+무료) (DG) | 5μL | 10μL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45μL | 0.9μL | 4.5mM |
| 4×동액보호제1 | 6.25μL | 12.5μL | 1× |
| 25×프라이머-프로브 믹스2 | 1μL | 2μL | 1× |
| 템플릿 DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25μL까지 | 50μL까지 | —— |
1. 프라이머의 최종 농도가 0.2μM이면 일반적으로 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.반응 성능이 좋지 않은 경우 필요에 따라 프라이머 농도를 0.2-1μM 범위 내로 조정하십시오.프로브 농도는 일반적으로 최적의 조합을 찾기 위해 기울기 실험을 통해 0.1-0.3μM 범위 내에서 최적화됩니다.
2. 다양한 유형의 템플릿에 포함된 표적 유전자의 복제 수는 다양합니다.필요한 경우 최적의 템플릿 첨가량을 결정하기 위해 기울기 희석을 수행할 수 있습니다.
3. 이 시스템은 동결건조될 수 있습니다.고객이 동결 건조 요구 사항 없이 이 시스템을 사용하는 경우 4×동결 보호제를 선택적으로 추가할 수 있습니다. 동결 건조 제품이 필요한 경우 액체 시약 단계 제품 성능 검증 중에 동결 건조 시스템 구성 요소와의 일관성을 보장하기 위해 4×동결 보호제를 추가해야 합니다. 그리고 효과.
시스템을 사용할 때d 동결건조용으로 준비한다. 체계 as 수행원:
| 구성 | 25µL 반응 시스템 |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+무료) (DG) | 5μL |
| 250mM MgCl2 | 0.45μL |
| 4×동액보호제 | 6.25μL |
| 25×프라이머-프로브 믹스 | 1μL |
| ddH2O | 18~20μL까지 |
* 다른 동결건조 시스템이 필요한 경우 별도 문의하시기 바랍니다.
동결건조 과정ss
| 절차 | 온도 | 시간 | 상태 | 압력 |
| 사전 냉동 | 4℃ | 30 분 | 잡고 있다 |
1기압 |
| -50℃ | 60분 | 냉각 | ||
| -50℃ | 180분 | 잡고 있다 | ||
| 1차 건조 | -30℃ | 60분 | 난방 |
궁극의 진공 |
| -30℃ | 70분 | 잡고 있다 | ||
| 2차 건조 | 25℃ | 60분 | 난방 |
궁극의 진공 |
| 25℃ | 300분 | 잡고 있다 |
2. 위 동결건조 과정은 참고용입니다.다양한 제품 유형과 다양한 동결 건조기에는 다양한 매개변수가 있으므로 실제 상황에 따라 조정이 이루어질 수 있습니다.사용 중 조건.
3. 다양한 동결건조 공정은 동결건조된 제품의 다양한 배치 크기에 적합할 수 있습니다.제품이므로 대규모 생산에 사용할 경우 충분한 테스트 검증이 수행되어야 합니다.
동결건조 사용 지침d 파우더
1. 동결건조된 분말을 간단히 원심분리합니다.
2. 동결건조된 분말에 핵산 주형을 추가하고 물을 최대 25μL까지 추가합니다.
3. 원심분리로 잘 혼합하고 기계에서 작동시킵니다.
품질 관리:
1. 기능 테스트: qPCR의 민감도, 특이성, 재현성.
2. 외인성 뉴클레아제 활성 없음, 외인성 엔도/엑소뉴클레아제 오염 없음.
기술적 인 정보:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG는 새로운 hot-start 효소를 사용하여 1~5분 이내에 신속한 hot-start가 가능합니다.특수 완충액 제제를 통해 다중 형광 정량 PCR 반응에 적합합니다.
2. 이는 형광 정량적 PCR 한계 검출의 감도를 크게 향상시켜 증폭 곡선을 정규화하고 형광 값이 저농도 주형에서 명백한 개선을 얻도록 하는 더 높은 특이성을 가지며, 이는 고감도 형광 정량적 PCR 검출 시약으로 적합합니다.
3. Annealing 온도가 낮거나 200bp 이상의 단편인 경우에는 3-step 방식을 권장합니다.
4. dUTP의 활용 효율과 UNG 효소에 대한 민감도는 표적 유전자에 따라 다르므로 UNG 시스템을 사용하면 검출 민감도가 감소하는 경우 반응 시스템을 조정하고 최적화해야 합니다.기술지원이 필요한 경우 당사로 문의하시기 바랍니다.
5. 증폭 전후에는 전용 구역과 피펫을 사용하고, 작업 중에는 장갑을 착용하고 자주 교체하십시오.PCR 산물에 의한 시료 오염을 최소화하기 위해 PCR 완료 후 반응 튜브를 열지 마십시오.
