범용 SYBR GREEN qPCR Premix(파란색)
고양이 번호: HCB5041B
Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based)는 높은 민감도와 특이성을 특징으로 하는 2×real-time 정량 PCR 증폭을 위한 pre-solution이며, 색상은 파란색이며, 샘플 추가 추적 효과가 있습니다.핵심 구성 요소인 Taq DNA Polymerase는 항체 Hot Start를 사용하여 시료 전처리 중 프라이머 어닐링으로 인한 비특이적 증폭을 효과적으로 억제합니다.동시에, 이 공식은 PCR 반응의 증폭 효율을 향상시키고 서로 다른 GC 함량(30~70%)을 갖는 유전자의 증폭을 균등하게 하기 위해 촉진 인자를 추가하여 정량 PCR이 광범위한 정량에서 좋은 선형 관계를 얻을 수 있도록 합니다. 지역.이 제품에는 대부분의 qPCR 장비에 적용할 수 있는 특수 ROX Passive Reference Dye가 포함되어 있습니다.다양한 기기에서 ROX 농도를 조정할 필요는 없습니다.증폭을 위한 반응 시스템을 준비하려면 프라이머와 템플릿만 추가하면 됩니다.
구성요소
유니버설 블루 qPCR 마스터 믹스
보관 조건
본 제품은 아이스팩과 함께 배송되며 -25℃~-15℃에서 18개월간 보관 가능합니다.반응계를 보관하거나 준비할 때 강한 빛 조사를 피할 필요가 있습니다.
사양
| 집중 | 2× |
| 탐지 방법 | SYBR |
| PCR 방법 | qPCR |
| 중합효소 | Taq DNA 중합효소 |
| 샘플 유형 | DNA |
| 응용장비 | 대부분의 qPCR 장비 |
| 상품 유형 | 실시간 형광 정량 PCR을 위한 SYBR 프리믹스 |
| (신청)에 적용 | 유전자 발현 |
지침
1.반응 시스템
| 구성요소 | 용량(μL) | 용량(μL) | 최종 농도 |
| 범용 SYBR GREEN qPCR 프리믹스 | 25 | 10 | 1× |
| 포워드 프라이머(10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| 리버스 프라이머(10μmol/L) | 1 | 0.4 | 0.2μmol/L |
| DNA | X | X | |
| ddH2O | 최대 50 | 최대 20 | - |
[참고]: 세게 흔들어서 과도한 거품이 발생하지 않도록 사용하기 전에 잘 섞으십시오.
a) 프라이머 농도: 최종 프라이머 농도는 0.2μmol/L이며, 적절하게 0.1~1.0μmol/L 사이에서 조정할 수도 있습니다.
b) 템플릿 농도: 템플릿이 희석되지 않은 cDNA 저장 용액인 경우 사용되는 부피는 qPCR 반응 전체 부피의 1/10을 초과해서는 안 됩니다.
c) 템플릿 희석: cDNA 저장 용액을 5~10배로 희석하는 것이 좋습니다.증폭을 통해 얻은 Ct 값이 20~30사이클일 때 추가되는 최적의 템플릿 양이 더 좋습니다.
d) 반응 시스템: 표적 유전자 증폭의 효율성과 반복성을 보장하기 위해 20μL 또는 50μL를 사용하는 것이 좋습니다.
e) 시스템 준비: 매우 깨끗한 벤치에서 준비하고 뉴클레아제 잔류물이 없는 팁과 반응 튜브를 사용하십시오.필터 카트리지와 함께 팁을 사용하는 것이 좋습니다.교차 오염 및 에어로졸 오염을 피하십시오.
2.반응 프로그램
표준 프로그램
| 사이클 단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
| 초기 변성 | 95℃ | 2분 | 1 |
| 변성 | 95℃ | 10초 | 40 |
| 어닐링/연장 | 60℃ | 30초★ | |
| 용융 곡선 단계 | 기기 기본값 | 1 | |
빠른 프로그램
| 사이클 단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
| 초기 변성 | 95℃ | 30초 | 1 |
| 변성 | 95℃ | 3초 | 40 |
| 어닐링/연장 | 60℃ | 20초★ | |
| 용융 곡선 단계 | 기기 기본값 | 1 | |
[참고]: 빠른 프로그램은 대다수의 유전자에 적합하며, 표준 프로그램은 개별 복잡한 2차 구조 유전자에 대해 시도할 수 있습니다.
a) Annealing 온도 및 시간: Primer 및 Target Gene의 길이에 따라 조정하시기 바랍니다.
b) 형광 신호 획득(★): 기기 사용 지침의 요구 사항에 따라 실험 절차를 설정하십시오.
c) 용융 곡선: 기기 기본 프로그램을 정상적으로 사용할 수 있습니다.
3. 결과 분석
정량적 실험에는 최소 3개의 생물학적 복제물이 필요했습니다.반응 후 증폭곡선과 용융곡선을 확인해야 합니다.
3.1 증폭 곡선:
표준 증폭 곡선은 S자 모양입니다.정량 분석은 Ct 값이 20~30 사이일 때 가장 정확합니다. Ct 값이 10 미만인 경우 주형을 희석하여 다시 테스트해야 합니다.Ct 값이 30-35 사이인 경우 증폭 효율을 향상하고 결과 분석의 정확성을 보장하기 위해 템플릿 농도 또는 반응 시스템의 부피를 높이는 것이 필요합니다.Ct 값이 35보다 큰 경우에는 검사 결과로 해당 유전자의 발현을 정량적으로 분석할 수 없으나 정성 분석에는 활용할 수 있습니다.
3.2 용융 곡선:
용융 곡선의 단일 피크는 반응 특이성이 좋고 정량 분석을 수행할 수 있음을 나타냅니다.용융 곡선에 이중 또는 다중 피크가 나타나면 정량 분석을 수행할 수 없습니다.Melting curve는 이중 peak를 나타내며, non-target peak가 프라이머 이량체인지 DNA agarose gel 전기영동을 통한 비특이적 증폭인지 판단이 필요합니다.프라이머 다이머인 경우 프라이머 농도를 낮추거나 증폭 효율이 높은 프라이머를 재설계하는 것이 좋습니다.비특이적 증폭인 경우 annealing 온도를 높이거나 특이성을 갖도록 프라이머를 다시 디자인하십시오.
노트
건강과 안전을 보장하기 위해 실험실 가운, 장갑 등 필요한 PPE를 착용하십시오!
이 제품은 연구용으로만 사용됩니다!
