원스텝 RT-qPCR SYBR 그린 프리믹스
고양이 번호: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix는 SYBR Green I 염료를 기반으로 한 형광 정량용 제품입니다.유전자 특이적 프라이머를 사용하면 역전사 및 qPCR 반응이 하나의 튜브에서 완료되므로 반복적인 캡 열기 및 피펫팅 작업이 필요하지 않으므로 분석 효율성이 크게 향상되고 오염 위험이 줄어듭니다.RNA 시료의 경우 효율적인 cDNA 합성을 위해 내열성 역전사효소를 사용하고 정량적 증폭을 위해 HotStart Taq DNA Polymerase를 사용합니다.최적화된 완충액 시스템 하에서 키트의 감도는 고도로 발현되는 표적의 경우 0.1pg까지 높을 수 있고, 적당히 발현되는 표적의 경우 1pg까지 높을 수 있습니다.이 키트는 DNA 샘플의 증폭 및 정량화에 적합합니다.이를 통해 다양한 식물 및 동물 샘플, 세포 및 미생물의 핵산을 민감하게 검출하고 정량화할 수 있습니다.
구성요소
| No | 이름 | 용량 | 용량 |
| 1 | 고급 버퍼 | 250μL | 2×1.25mL |
| 2 | 고급 효소 믹스 | 20μL | 200μL |
| 3 | RNase 프리 H2O | 250μL | 2×1.25mL |
보관 조건
본 제품은 -25~-15℃에서 빛을 피하여 1년간 보관해야 합니다.
지침
1.반응계 구성d
| 구성요소 | 용량(μL) | 용량(μL) | 최종 농도 |
| 고급 버퍼 | 12.5 | 25 | 1× |
| 고급 효소 믹스 | 1 | 2 | - |
| 정방향 프라이머(10μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2μmol/L |
| 리버스 프라이머(10μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2μmol/L |
| RNA 탐플레이트b | X | X | - |
| RNase 프리 H2영형c | 25까지 | 50까지 | - |
노트:
1) 가.티최종 프라이머 농도는 0.2μmol/L이었으며, 이는 적절하게 0.1~1μmol/L 사이에서 조정될 수도 있습니다.
2) ㄴ.이 시약은 총 RNA가 1pg~1μg 범위에 있어 매우 민감하며, 인간 샘플을 테스트한 결과 1pg~100ng의 최적 입력이 나타났으며 전체 Ct 값을 15~30 범위로 적절하게 제어했습니다.
3) 다.표적 유전자 증폭의 유효성과 재현성을 보장하기 위해 20μL 또는 50μL 사용을 권장합니다.
4) 라.울트라 클린 벤치에서 준비하고 뉴클레아제 잔여물이 없는 팁과 반응 튜브를 사용하십시오.필터 카트리지가 포함된 팁을 사용하는 것이 좋습니다.교차 오염 및 에어로졸 오염을 피하십시오.
2.반응 프로그램
| 사이클 단계 | 온도 | 시간 | 사이클 |
| 역전사 | 50℃a | 6분 | 1 |
| 초기 변성 | 95℃ | 5분 | 1 |
| 증폭반응 | 95℃ | 15초 | 40 |
| 60℃b | 30초 | ||
| 용융 곡선 단계 | 기기 기본값 | 1 | |
노트:
1) 가.역전사 온도는 실험 요구에 따라 50-55°C 사이에서 선택할 수 있습니다.DNA 샘플의 경우 역전사 과정을 생략할 수 있습니다.
2) ㄴ.특별한 경우에는 프라이머 Tm 값에 따라 어닐링/연장 온도를 조정할 수 있으며 60°C를 권장합니다.
노트
1. 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.
2. 안전을 위해 실험복과 일회용 장갑을 착용하고 작업하시기 바랍니다.
