M-MLV 역전사효소
RevScript 역전사효소는 유전공학 기술로 얻어집니다.더 높은 cDNA 합성 능력, 열 안정성 및 반응 온도 제한(최대 60°C)을 갖습니다.합성된 cDNA 생성물은 최대 10kb입니다.템플릿의 친화력을 높여 복잡한 2차 구조나 낮은 복제 유전자를 가진 RNA 템플릿의 역전사에 적합합니다.
구성요소
| 요소 | HC2003B-01 (10,000U) | HC2003B-02 (5*10,000U) | HC2003B-03 (200,000U) |
| RevScript 역전사효소(200U/μL) | 50μL | 5×50μL | 1mL |
| 5 × RevScript 버퍼 | 250μL | 1.25mL | 5mL |
보관상태
본 제품은 -25°C~-15°C에서 2년 동안 보관해야 합니다.
단위 정의
한 유닛은 Oligo(dT)를 프라이머로 사용하여 37°C에서 10분 안에 1 nmol의 dTTP를 산불용성 물질에 통합합니다.
반응 설정
1.RNA 주형의 변성(이 단계는 선택 사항입니다. RNA 주형의 변성은 2차 구조를 여는 데 도움이 되며, 이는 첫 번째 가닥 cDNA의 수율을 향상시킵니다.)
| 구성요소 | 용량 (μL) |
| RNase가 없는 ddH2O | 13까지 |
| 올리고(dT)18 (50μmol/L) 또는 무작위 프라이머(50μmol/L) 또는 유전자 특이적 프라이머(2μmol/L) | 1 |
| 또는 1 | |
| 또는 1 | |
| RNA 주형 | 엑스a |
노트:
1) a: 총 RNA: 1-5 ug 또는 mRNA: 1-500 ng
2) 65°C에서 5분간 배양한 후 즉시 얼음 위에 옮겨 2분간 식힙니다.간단한 원심분리로 반응액을 모으고, 다음 표와 같이 역전사 반응액을 첨가한다.부드럽게 피펫팅하여 혼합합니다.
1. 반응 혼합물 준비(20 μL 부피)
| 구성요소 | 용량 (μL) |
| 이전 단계의 혼합 | 13 |
| 5×버퍼 | 4 |
| dNTP 믹스(10nmol/L) | 1 |
| 역전사효소(200U/μL) | 1 |
| RNase 억제제(40U/μL) | 1 |
1.다음 조건에서 반응을 수행합니다.
| 온도(°C) | 시간 |
| 25°Ca | 5분 |
| 42°Cb | 15~30분 |
| 85°Cc | 5분 |
노트:
1) 가.25°C에서 5분 동안 배양하는 것은 무작위 헥사머를 사용하는 경우에만 필요합니다.올리고(dT) 사용 시에는 이 단계를 건너뛰세요.18또는 유전자 특이적 프라이머.
2) ㄴ.권장 역전사 온도는 42°C입니다. 2차 구조가 복잡하거나 GC 함량이 높은 템플릿의 경우 반응 온도를 50~55°C로 높이는 것이 좋습니다.
3) 다.역전사효소를 비활성화하기 위해 85°C에서 5분 동안 가열합니다.
4) 본 제품은 PCR이나 qPCR 반응에 직접 사용하거나 단기 보관을 위해 -20°C에서 보관할 수 있습니다.장기간 보관을 위해서는 제품을 분취하여 -80°C에서 보관하는 것이 좋습니다.빈번한 동결-해동을 피하십시오.
5) 이 제품은 1단계 RT-qPCR에 적합합니다. 25μL 반응 시스템마다 10-20U 역전사 효소를 추가하거나 실제 상황에 따라 역전사 효소의 양을 점진적으로 늘리는 것이 좋습니다.
노트
1.실험 장소를 깨끗하게 유지하십시오.작업 중에는 깨끗한 장갑과 마스크를 착용해야 합니다.실험에 사용되는 모든 소모품은 RNase 오염을 방지하기 위해 RNase가 없어야 합니다.
2. RNA 분해를 방지하기 위해 모든 절차는 얼음 위에서 수행되어야 합니다.
3. 높은 역전사 효율을 보장하려면 고품질의 RNA 샘플을 사용하는 것이 좋습니다.
4. 본 제품은 연구용으로만 사용됩니다.
5. 안전을 위해 실험복과 일회용 장갑을 착용하고 작업하시기 바랍니다.
