CHO HCP 엘리사 키트
이 분석에는 1단계 면역흡착 ELISA 방법이 사용됩니다.CHOK1 HCP를 포함하는 샘플은 HRP 표지 염소 항 CHOK1 항체 및 ELISA 플레이트에 코팅된 항 CHOK1 항체와 동시에 반응하여 최종적으로 고상 항체-HCP 표지 항체의 샌드위치 복합체를 형성합니다.결합되지 않은 항원-항체는 ELISA 플레이트를 세척하여 제거할 수 있습니다.충분한 반응을 위해 TMB 기질을 웰에 첨가합니다.정지용액을 첨가한 후 발색을 정지시키고, 마이크로플레이트 리더로 450/650nm에서 반응용액의 OD 또는 흡광도 값을 판독한다.OD 값 또는 흡광도 값은 용액의 HCP 함량에 비례합니다.이로부터 표준곡선에 따라 용액 내 HCP 농도를 계산할 수 있습니다.
애플리케이션
본 키트는 시료 내 CHOK1 숙주세포 단백질 잔기의 함량을 정량적으로 검출하는데 사용됩니다.
C구성 요소
| 일련번호 | 요소 | 집중 | 보관 조건 |
| 1 | CHOK1 HCP 표준 | 0.5mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | 항CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20℃, 빛으로부터 보호 |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, 빛으로부터 보호 |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2~8℃ |
| 5 | 솔루션 중지 | NA | RT |
| 6 | 마이크로플레이트 실러 | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2~8℃ |
| 8 | 고흡착 프리코팅 플레이트 | NA | 2~8℃ |
필요한 장비
| 소모품/장비 | 제조 | 목록 |
| 마이크로플레이트 리더 | 분자 장치 | Spectra Max M5, M5e 또는 동급 |
| 써모믹서 | 에펜도르프 | Eppendorf/5355 또는 동급 |
| 볼텍스 믹서 | 이카 | MS3 Digital 또는 동급 |
보관 및 안정성
1.-25~-15°C에서 운송하십시오.
2.보관 조건은 표 1과 같다.구성요소 1-2는 ≤–20°C에서 보관되고, 5-6은 실온에 보관됩니다.3,4,7,8은 2-8℃에 보관됩니다.유효기간은 12개월이다.
제품 매개변수
1.감도: 1ng/mL
2.검출 범위:3 - 100ng/mL
삼.정밀도: 분석 내 CV ≤ 10%, 분석 간 CV ≤ 15%
4.HCP 적용 범위: >80%
5.특이성: 이 키트는 정제 과정과 관계없이 CHOK1 HCP와 특이적으로 반응하므로 보편적입니다.
시약 준비
1.PBST 0.05%
ddH에 희석한 20×PBST 0.05% 15ml를 취합니다.2아, 300ml까지 만들었어요.
2.1.0% BSA
병에서 BSA 1g을 꺼내어 0.05% PBST 100ml에 희석하고 완전히 녹을 때까지 잘 섞은 후 2~8°C에 보관합니다.준비된 희석 완충액은 7일 동안 유효합니다.필요에 따라 준비하는 것이 좋습니다.
삼.검출 용액 2μg/mL
0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP 48μL를 취하고 1% BSA 11,952μL로 희석하여 최종 농도 2μg/mL 검출 용액을 얻습니다.
4.QC 및 CHOK1 HCP 표준 준비
| 튜브 아니요. | 원래의 | 집중 | 용량 | 1%BSA | 총량 | 결정적인 |
| A | 기준 | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
표: QC 및 표준 준비
분석 절차
1.위의 "시약 준비"에 표시된 대로 시약을 준비합니다.
2.50μL의 표준물질, 샘플 및 QC(표 3 참조)를 각 웰에 넣은 다음 100μL의 검출 용액(2μg/mL)을 추가합니다.플레이트를 실러로 덮고 ELISA 플레이트를 써모믹서 위에 놓습니다.500rpm, 25±3℃에서 2시간 동안 배양합니다.
삼.싱크대에서 마이크로플레이트를 뒤집고 코팅 용액을 폐기합니다.PBST 0.05% 300μL를 각 웰에 피펫팅하여 ELISA 플레이트를 세척하고 용액을 버리고 세척을 3회 반복합니다.깨끗한 종이 타월 위에 접시를 뒤집어서 두드려서 말립니다.
4.각 웰에 100μL의 TMB 기질(표 1 참조)을 첨가하고 ELISA 플레이트를 밀봉한 후 어둠 속에서 25±3℃에서 15분간 배양합니다.
5.각 웰에 정지 용액 100μL를 피펫으로 넣습니다.
6.마이크로플레이트 리더를 사용하여 450/650nm 파장의 흡광도를 측정합니다.
7.SoftMax 또는 동등한 소프트웨어로 데이터를 분석합니다.4개 매개변수 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 표준 곡선을 그립니다.
표준곡선의 예
참고: 샘플 내 HCP 농도가 표준 곡선의 상한을 초과하는 경우 테스트 전에 희석 완충액으로 적절하게 희석해야 합니다.
노트
정지 용액은 2M 황산이므로 튀지 않도록 조심해서 다루십시오!
