울트라뉴클레아제
UltraNuclease는 Serratia marcescens에서 추출한 유전적으로 조작된 엔도뉴클레오타제입니다. 이는 광범위한 조건에서 이중 또는 단일 가닥, 선형 또는 원형의 DNA 또는 RNA를 분해할 수 있으며, 핵산을 3-5 염기 길이의 5'-모노포스페이트 올리고뉴클레오티드로 완전히 분해할 수 있습니다. .유전공학적 변형 후 제품을 대장균(E. coli)에서 발효, 발현, 정제하여 세포 상등액 및 세포 용해물의 점도를 감소시키는 과학적 연구뿐만 아니라 단백질의 정제 효율 및 기능적 연구를 향상시켰습니다.또한 유전자 치료, 바이러스 정제, 백신 생산, 단백질 및 다당류 제약 산업에서 숙주 잔류 핵산 제거 시약으로 사용할 수 있습니다.
제품 특징
| CAS 번호 | 9025-65-4 |
| EC 번호 | |
| 분자 무게 | 30kDa |
| 등전점 | 6.85 |
| 단백질 순도 | ≥99%( SDS-PAGE 및 SEC-HPLC) |
| 특정 활동 | ≥1.1×106U/mg |
| 최적온도 | 37°C |
| 최적의 pH | 8.0 |
| 프로테아제활성 | 부정적인 |
| 바이오버든 | <10CFU/100,000U |
| 잔여 숙주 세포 단백질 | 10ppm 이하 |
| 헤비메탈 | 10ppm 이하 |
| 세균 내독소 | <0.25EU/1000U |
| 저장 버퍼 | 20mM 트리스-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% 글리세롤 |
보관 조건
운송 시 0°C 이하, -25~-15°C 보관, 유효 기간 2년(동결-해동 방지).
단위 정의
37℃, pH 8.0에서 올리고뉴클레오타이드 절단을 통해 소화된 37μg 연어정자 DNA와 동일하게 △A260의 흡수값을 30분 이내에 1.0씩 변화시키는데 사용된 효소의 양을 활성단위(U)로 정의하였다.
품질 관리
잔여 숙주 세포 단백질: 엘리사 키트
•프로테아제 잔류물: 250KU/mL UltraNuclease를 기질과 60분간 반응시켰으나 활성이 검출되지 않았습니다.
•세균 내독소: LAL-Test, 중화인민공화국 약전 4권(2020년판) 겔 한도 시험 방법.일반 규칙(1143).
•바이오버든: 중화인민공화국 약전 4권(2020년판) - 일반
무균 시험 규칙(1101), PRC 국가 표준, GB 4789.2-2016.
•헤비메탈:ICP-AES, HJ776-2015.
작업
SDS 농도가 0.1% 이상 또는 EDTA일 때 UltraNuclease 활성이 크게 억제되었습니다.
농도가 1mM 이상이었습니다. 계면활성제 Triton X-100, Tween 20 및 Tween 80은 뉴클레아제에 영향을 미치지 않았습니다.
농도가 1.5% 미만일 때의 특성.
| 작업 | 최적의 작동 | 유효한 작업 |
| 온도 | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0-11.0 |
| Mg2+ | 1~2mM | 1~15mM |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-메르캅토에탄올 | 0-100mM | >100mM |
| 1가 금속 이온 (Na+, K+ 등) | 0-20mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
사용법과 복용량
• 백신 제품에서 외인성 핵산을 제거하고 잔류 핵산 독성 위험을 줄이며 제품 안전성을 향상시킵니다.
• 핵산으로 인한 Feed Liquid의 점도를 감소시키고 처리시간을 단축시키며 단백질 수율을 높입니다.
• 도움이 되는 입자(바이러스, 봉입체 등)를 감싸고 있는 핵산을 제거합니다.
입자의 방출 및 정제에 사용됩니다.
| 실험 유형 | 단백질 생산 | 바이러스,백신 | 세포 약물 |
| 셀 번호 | 1g 셀 습윤 중량 (10ml 완충액으로 재현탁) | 1L 발효 액체 상등액 | 1L 배양 |
| 최소 복용량 | 250U | 100U | 100U |
| 권장 복용량 | 2500U | 25000U | 5000U |
• 뉴클레아제 처리는 컬럼 크로마토그래피, 전기영동 및 블로팅 분석을 위한 시료의 분해능과 회수율을 향상시킬 수 있습니다.
• 유전자 치료에서는 정제된 아데노 관련 바이러스를 얻기 위해 핵산을 제거합니다.
