DNase I
DNase I(Deoxyribonuclease I)은 단일 또는 이중 가닥 DNA를 소화할 수 있는 endodeoxyribonuclease입니다.이는 포스포디에스테르 결합을 인식하고 절단하여 5' 말단에 인산염 그룹이 있고 3' 말단에 수산기가 있는 모노데옥시뉴클레오티드 또는 단일 또는 이중 가닥 올리고데옥시뉴클레오티드를 생성합니다.DNase I의 활성은 Ca2+에 따라 달라지며 Mn2+ 및 Zn2+와 같은 2가 금속 이온에 의해 활성화될 수 있습니다.5mM Ca2+는 가수분해로부터 효소를 보호합니다.Mg2+가 있는 경우, 효소는 DNA 가닥의 모든 부위를 무작위로 인식하고 절단할 수 있습니다.Mn2+가 존재하면 DNA의 이중 가닥이 거의 동일한 위치에서 동시에 인식되고 절단되어 편평한 말단 DNA 단편 또는 1-2개의 뉴클레오티드가 돌출된 끈적한 말단 DNA 단편을 형성할 수 있습니다.
제품 속성
소 췌장 DNase I을 효모 발현 시스템에서 발현시키고 정제했습니다.
C구성 요소
| 요소 | 용량 | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase 없음 | 20μL | 200μL | 1mL | 10mL |
| 10×DNase I 버퍼 | 1mL | 1mL | 5×1mL | 5×10mL |
운송 및 보관
1. 보관 안정성: – 보관 시 15℃~-25℃;
2. 운송 안정성 : 얼음 팩으로 운송;
3. 공급되는 물질: 10mM Tris-HCl, 2mM CaCl2, 50% 글리세롤, 25℃에서 pH 7.6.
단위 정의
1 단위는 37°C에서 10분 안에 1μg의 pBR322 DNA를 완전히 분해하는 효소의 양으로 정의됩니다.
품질 관리
RNase:5U의 DNase I과 1.6μg MS2 RNA를 37℃에서 4시간 동안 처리한 결과 아가로스 겔 전기영동으로 측정한 결과 분해가 발생하지 않았습니다.
세균 내독소:LAL 테스트는 중국 약전 IV 2020 판, 겔 한도 테스트 방법, 일반 규칙(1143)에 따릅니다.세균 내독소 함량은 10 EU/mg 이하여야 합니다.
사용 지침
1. RNase-free 튜브에 아래 비율에 따라 반응 용액을 준비합니다.
| 요소 | 용량 |
| RNA | Xμg |
| 10 × DNase I 버퍼 | 1μL |
| DNase I, RNase 없음(5U/μL) | μg RNA당 1U |
| ddH2O | 최대 10μL |
15분 동안 2.37℃;
3. 종결 완충액을 첨가하여 반응을 정지시키고, 65℃에서 10분간 가열하여 DNase I을 비활성화시킵니다. 시료는 다음 전사 실험에 바로 사용할 수 있습니다.
노트
1. RNA 1μg당 1U DNase I을 사용하거나, 1μg 미만의 RNA에는 1U DNase I을 사용하십시오.
2. EDTA는 효소 불활성화 동안 RNA가 분해되는 것을 방지하기 위해 최종 농도 5mM이 되도록 첨가해야 합니다.
